中(zhōng)安康華重點聯合細胞科研實驗室:一(yī)份高質量細胞是如何産生(shēng)的?

發布日期:2023-02-18 18:25:15

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提及幹細胞療法,回輸量一(yī)直是繞不開(kāi)的話(huà)題。


許多人似乎将回輸數量當成一(yī)份幹細胞的評判标準,認爲數量越多的越好。


美國學者對登記在美國國立衛生(shēng)研究院臨床試驗登記系統上的900餘項間充質幹細胞臨床試驗進行了數據分(fēn)析,并将結論發表在2019年的《SCTM》雜(zá)志(zhì)上。研究表明,幹細胞治療存在有效劑量範圍。所以雖然幹細胞的确存在最佳回輸劑量,但最終數值還是要臨床醫生(shēng)綜合每個患者的疾病程度及自身狀況、注射方式才能給出最準确的方案。


因此數量≠質量,優質幹細胞的背後:細胞活性、細胞來源、細胞存活率缺一(yī)不可。



一(yī)份高質量細胞具有哪些特質?

随着幹細胞進入臨床轉化,國家衛生(shēng)計生(shēng)委辦公廳、國家食品藥品監管總局辦公廳在2015年發布了《幹細胞制劑質量控制及臨床前研究指導原則(試行)》,其中(zhōng)就提到不少影響細胞質量的因素可供我(wǒ)(wǒ)們參考,包括細胞來源,細胞活率,細胞生(shēng)長活性。


·細胞來源

想要獲得高質量的幹細胞,細胞來源的重要性不言而喻。無論你是選擇了異體(tǐ)回輸還是“自給自足”,細胞供者本身的年齡及身體(tǐ)狀況都會對細胞質量産生(shēng)影響。


随着人類的衰老,細胞的活力也是會逐漸減弱的。2019年,英國利茲大(dà)學的科研團隊就通過體(tǐ)外(wài)培養的方式證實:年輕人的骨髓間充質幹細胞增殖能力明顯要強于老年人。
△Young(19-37)與old(61-76)歲年齡組細胞生(shēng)長活力對比
年輕組的生(shēng)長面積及總量明顯高于老年組

所以從年齡這個因素考慮,圍産組織來源的臍帶、胎盤、羊膜間充質幹細胞(有零歲細胞之稱)應該是最優解,年輕人的骨髓、脂肪間充質幹細胞次之,老年人則不建議直接使用自體(tǐ)幹細胞治療。


△ 年輕人與老年人體(tǐ)内細胞對比

接下(xià)來,是供者本身的身體(tǐ)狀況。《幹細胞制劑質量控制及臨床前研究指導原則(試行)》要求:異體(tǐ)供體(tǐ)必須經過檢驗篩查證明無人源特定病毒(包括HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、CMV等)的感染,無梅毒螺旋體(tǐ)感染,但這些隻能算是基礎。


除了病毒感染,許多疾病也會影響自體(tǐ)間充質幹細胞的功能及效果,如遺傳性疾病、自身免疫性疾病和部分(fēn)慢(màn)性疾病等等。以常見的糖尿病爲例,2017年《SCTM》上有研究證實:長期患有2型糖尿病會降低幹細胞的增殖能力、免疫抑制潛力及存活率。尤其是當你患有糖尿病超過10年且較爲肥胖時,采用自體(tǐ)幹細胞進行治療就不會是一(yī)個明智的選擇。


·細胞存活率

我(wǒ)(wǒ)們都知(zhī)道,當幹細胞回輸到體(tǐ)内,隻有活着的幹細胞能真正起到修複或治療的作用,失活細胞不僅有礙有效性,有時還會“幫倒忙”,即引發機體(tǐ)毒性反應。


所以細胞存活率不但關乎細胞質量,更涉及人體(tǐ)自身的安全。也正因如此,大(dà)多監管要求新鮮細胞産品活率要≥90%。


·細胞生(shēng)長活性

生(shēng)長活性其實有着許多評定标準,如細胞倍增時間、細胞周期、克隆形成率、端粒酶活性等等,而這些指标都被“細胞代次”所影響着。


細胞代次指的是幹細胞在體(tǐ)外(wài)培養中(zhōng)的傳代次數,一(yī)般剛從臍帶、胎盤、羊膜等提取的幹細胞是原始P0代,傳一(yī)代是P1代幹細胞,并以此類推。在此過程中(zhōng),還有一(yī)個關鍵特性:即幹細胞的生(shēng)物(wù)學效力和增殖特性,會随着傳代次數的增加逐漸下(xià)降。


首先,細胞代次并不宜低于3代。從各代幹細胞生(shēng)長曲線檢測結果來看,P4-P7代的數據其實也都在高活性範圍之内,并未與前3代細胞形成斷層差距,所以要同時兼具數量、安全及幹細胞活性,P3-P7代次的幹細胞是最佳的選擇。


△ 圖a代表P3代,圖b代表P8代



中(zhōng)安康華細胞科研實驗室:
一(yī)份高質量的細胞是如何生(shēng)産的?

中(zhōng)安康華重點聯合細胞科研實驗室采用最高要求的生(shēng)産和質量控制标準,細胞産品爲确保每一(yī)代細胞質量均一(yī)穩定,質量控制需要貫穿于細胞生(shēng)産工(gōng)藝的每個環節,從整個生(shēng)産流程的五大(dà)生(shēng)産環節進行質量檢測(QC)和質量控制(QA),确保每一(yī)份細胞産品“全生(shēng)命周期”的質量。從組織采集,細胞分(fēn)離(lí)、擴增、收獲,以及産品放(fàng)行,每個環節每個步驟,都需要相應的質量控制方法和标準。


實驗室嚴格按照GMP标準設計,空氣潔淨度達到整體(tǐ)萬級,局部百級的要求,配置有國際頂尖的實驗室儀器設備,獨立的空調淨化系統、獨立的清洗消毒滅菌系統和中(zhōng)央監控系統。


細胞質量管理體(tǐ)系參照美國FDA指南(nán),中(zhōng)國GMP标準、樣本從采集到細胞制備和服務等全流程設計的全部因素(包括但不限于人,機,料,法,環)實施嚴格的管理和監控,專業個性化的服務體(tǐ)系,标準化、流程化的管理方針,爲客戶提供高質量的細胞産品和服務。


·組織采集:

幹細胞制備包括幹細胞采集、分(fēn)離(lí)、擴增培養等階段,樣本采集是首要關注點。


中(zhōng)安康華重點聯合細胞科研實驗室細胞供體(tǐ)采用嚴格的篩查标準:從年齡因素考慮,圍産組織來源的臍帶、胎盤、羊膜間充質幹細胞應是最優供體(tǐ),年輕人的骨髓、脂肪間充質幹細胞次之;其次重點關注供者背景清晰,無人源特定病毒(包括HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、CMV 等)的感染,無梅毒螺旋體(tǐ)感染,同時無疾病如遺傳性疾病、自身免疫性疾病和部分(fēn)慢(màn)性疾病等。從源頭開(kāi)始,保障每一(yī)份源細胞的安全與優質。


·細胞的分(fēn)離(lí)、擴增:

細胞産品生(shēng)産工(gōng)藝應該經過驗證,每一(yī)批次的細胞産品的工(gōng)藝驗證應當符合相應的驗證要求。細胞産品分(fēn)離(lí)和擴增過程中(zhōng)應當采取措施盡可能防止污染和交叉污染,控制質量風險。中(zhōng)安康華重點聯合科研實驗室細胞培養在符合《藥品生(shēng)産質量管理規範》(GMP)要求基礎上嚴格執行,其中(zhōng)需重點關注細胞培養基應使用無血清培養基,不得使用動物(wù)源血清和同種異體(tǐ)人血清或血漿。這一(yī)要求就避免臨床使用中(zhōng)可能出現的免疫排斥和病原體(tǐ)污染。同時生(shēng)産過程中(zhōng),全程按照質量标準控制要求進行無菌檢測,切實做好留樣工(gōng)作,并且在産品可追溯系統裏進行全程記錄。

·細胞收獲:

中(zhōng)安康華重點聯合科研實驗室嚴格執行臨床級細胞産品質量标準:嚴格的第三方質量檢測和實驗室檢測,包括細胞活力、生(shēng)物(wù)學功能、緻瘤性、微生(shēng)物(wù)、支原體(tǐ)、内毒素等檢測。其中(zhōng)細胞活力、生(shēng)物(wù)學功能對于細胞治療的效果至關重要,而緻瘤性、微生(shēng)物(wù)、支原體(tǐ)和内毒素檢測則和幹細胞的安全性密切相關。此外(wài),質量合格的細胞産品,在移植前還需進行放(fàng)行檢測,進一(yī)步對微生(shēng)物(wù)、支原體(tǐ)和内毒素進行符合檢驗,以免在移植過程中(zhōng)或移植後出現急性或亞急性嚴重不良反應,如發熱、過敏、細菌性血症等。


·存儲和運輸:

細胞的存儲和運輸條件主要影響幹細胞的活力。中(zhōng)安康華重點聯合科研實驗室優先使用新鮮幹細胞在4~10℃全程冷鏈運輸,且運輸溫度應實時記錄可查,并在出庫後12小(xiǎo)時内完成移植。如果使用的是凍存細胞,則使用最小(xiǎo)劑量的可臨床輸注的凍存液,在氣相液氮容器或幹冰條件下(xià)運輸,并在移植前于37℃解凍細胞,并用含5%人血清白(bái)蛋白(bái)的生(shēng)理鹽水稀釋到合适濃度進行移植。


·流程對接和記錄:

中(zhōng)安康華重點聯合科研實驗室在細胞産品的采集、制備、質檢、存儲、運輸和臨床輸注過程中(zhōng),須對細胞的來源、加工(gōng)過程及使用過程進行全方位對接和記錄,實現細胞制劑在各個環節中(zhōng)的唯一(yī)标識,做到有據可依、可追溯。


不同于傳統的藥物(wù),細胞制劑的細胞制備技術和治療方案具有多樣性、複雜(zá)性和特殊性,因此爲了确保細胞制劑臨床應用的安全性和有效性,對于整個過程的每一(yī)階段,都須嚴格遵守細胞臨床應用的相關指導原則和标準,以避免不良事件的發生(shēng),保持整個行業的健康發展。

參考文獻


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5.《幹細胞制劑質量控制及臨床前研究指導原則(試行)》國家衛生(shēng)計生(shēng)委辦公廳、國家食品藥品監管總局辦公廳

6.The Analysis of In Vivo Aging in Human Bone Marrow Mesenchymal Stromal Cells Using Colony-Forming Unit-Fibroblast Assay and the CD45 low CD271 + Phenotype.https://doi.org/10.1155/2019/5197983

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8. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. 

https://doi.org/10.1080/14653240600855905


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